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工作距離定義很簡單就是從成像清晰開始，算物鏡的前透鏡到樣品之間的距離，我們把這個稱之為工作距離，放大倍數越高的物鏡工作距離也就越多。
我們通常把物鏡焦點所處的像面稱之為焦平面，在焦平面上的像是最清晰的。在焦平面上面或者下面看的物像我們這個距離稱之為焦深，焦深和物鏡的放大倍數是成反比的，放大倍數越大焦深就越小。所以我們在用高倍物鏡看樣品時候需要先從小倍數找到物體的成像面，然后在往高倍數調整，如果直接用高倍數觀察的話成像面很有可能從視眼劃過，難以定位。
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